显微镜怎么用、装片往哪移、污点在哪、放大倍数怎么算、细胞数目/明暗怎么变;有丝分裂/质壁分离/DNA与RNA分布/线粒体怎么观察;还原糖、脂肪、蛋白质、淀粉、DNA、CO₂、酒精、色素——试剂配什么颜色。把"操作+试剂+现象"三件事一次背死,选择题送分。
显微镜题就四类:算放大倍数、低倍换高倍的步骤、换镜后视野明暗与细胞数目变化、污点在哪、装片往哪移。下面逐条背死。
放大的是"长和宽"(线性),不是面积。放大倍数越大 → 视野内细胞数目越少、每个细胞越大、视野越暗、看到的范围越小、物镜离装片越近(工作距离小)。
| 项目 | 低倍镜 | 高倍镜 |
|---|---|---|
| 视野范围 / 细胞数目 | 大 / 多 | 小 / 少 |
| 视野亮度 | 亮 | 暗(需大光圈/凹面镜) |
| 单个细胞大小 | 小 | 大 |
| 物镜与装片距离 | 远 | 近 |
| 物镜镜头长度 | 短 | 长(倍数越高越长) |
⚠ 换高倍镜时绝不能动粗准焦螺旋(易压碎装片、玻片),只用细准焦螺旋微调。换镜前必须先把目标移到正中央,否则换上高倍就找不到了。
显微镜下所成的是倒立的虚像(上下、左右都颠倒)。所以要把偏在某方向的物像移到中央,装片就朝同一方向移动——物像偏左上,就把装片往左上推。口诀:物像偏哪边,装片就往哪边移。
⚠ 直觉容易搞反:因为像是倒的,你把装片往右移,物像看起来是往左走。记结论就行:偏哪移哪。
点箭头把物像(蓝细胞)移向中央——注意装片实际移动方向与物像同向。切换低/高倍,看细胞数目变少、变大、变暗。
视野里有个污点,判断它在目镜、物镜、还是装片上,是必考题。方法:排除法——转动谁污点跟着动,污点就在谁上。
记忆:先转目镜、再动装片,都排除了剩下就是物镜。物镜一般不转(换镜才转),所以用"排除法"锁定它。
⚠ 陷阱:题目问"如何确定污点是否在物镜上"——不能靠"转物镜"(转物镜就换镜了),要靠先排除目镜和装片,剩下的才是物镜。
先选污点真实位置,再依次做操作,看污点是否跟着动,推断它在哪。
材料:洋葱(或大蒜、蚕豆)根尖分生区(细胞排列紧密、近正方形、有分裂能力)。取材:根尖 2–3 mm。
观察:大多数细胞处于分裂间期(数目最多);找中期——染色体形态数目最清晰、排在赤道板上,最适合观察计数。
⚠ 解离后细胞已死亡,观察不到某一个细胞连续分裂的动态过程;看到的是不同时期细胞的"定格"。龙胆紫、醋酸洋红都是碱性染料。
材料:紫色洋葱鳞片叶外表皮(有紫色大液泡,便于观察)。试剂:0.3 g/mL 蔗糖溶液(分离)、清水(复原)。
原理:成熟植物细胞是一个渗透系统;原生质层(细胞膜+液泡膜+之间细胞质)相当于半透膜,伸缩性大于细胞壁。外界浓度高 → 细胞失水 → 原生质层与细胞壁分离(质壁分离);换清水 → 吸水 → 复原。
⚠ 只能用活的、成熟的植物细胞(有大液泡、有原生质层)。若用高浓度尿素/KNO₃ 会自动复原(溶质可被吸收);死细胞不能分离。
材料:人口腔上皮细胞(或洋葱表皮)。试剂:甲基绿吡罗红(派洛宁)混合染色剂。
需用8% 盐酸处理:改变细胞膜通透性、使染色体上 DNA 与蛋白质分离,利于染色。此实验要现配现用甲基绿吡罗红混合液。
⚠ 结论是"DNA 主要分布在核、RNA 主要在质",不是绝对——线粒体、叶绿体也有 DNA。染色剂要现配。
材料:人口腔上皮细胞。试剂:健那绿(詹纳斯绿 B)——专一性染线粒体的活体染料。
健那绿使活细胞的线粒体呈蓝绿色(线粒体中的酶能维持其氧化态显色)。观察时细胞必须保持活性。
⚠ 健那绿是活体染色剂——细胞必须是活的才能显色;这是它与龙胆紫(染死细胞染色体)的最大区别。
点"下一步"走一遍流程,每步显示试剂/目的;走到制片后可"找中期"高亮最佳观察时期。
这一批是检测有机物 / 气体 / 色素的看家试剂,颜色配对必背。特别注意斐林试剂需现配、水浴加热这个高频坑。
| 检测对象 | 试剂 | 现象(颜色) | 关键条件 |
|---|---|---|---|
| 还原糖(葡萄糖/果糖/麦芽糖) | 斐林试剂(甲液NaOH+乙液CuSO₄) | 砖红色沉淀 | 甲乙现配现用、50–65℃水浴加热 |
| 脂肪 | 苏丹Ⅲ / 苏丹Ⅳ | 橙黄色 / 红色 | 需切片、用体积分数50%酒精洗浮色 |
| 蛋白质 | 双缩脲试剂(A液NaOH+B液CuSO₄) | 紫色 | 先加A后加B、不加热、B液少量 |
| 淀粉 | 碘液(I₂) | 蓝色 | 常温即可 |
| DNA | 二苯胺 | 蓝色 | 需沸水浴加热 |
| CO₂ | 溴麝香草酚蓝水溶液 / 澄清石灰水 | 蓝→绿→黄 / 石灰水变浑浊 | CO₂ 越多变化越明显 |
| 酒精 | 重铬酸钾(酸性条件) | 橙色→灰绿色 | 需浓硫酸酸化 |
斐林 vs 双缩脲(都含 NaOH + CuSO₄,极易混):
· 斐林:甲NaOH+乙CuSO₄ 等量混合后再加、CuSO₄浓度较高、要水浴加热 → 测还原糖砖红。
· 双缩脲:先加A(NaOH)造碱性环境、再加少量B(CuSO₄)、不加热 → 测蛋白质紫色。
⚠ 检测还原糖不能用含本身有色的材料(如番茄、甜菜),否则掩盖砖红色 → 常选苹果、梨、白萝卜(近无色、还原糖多)。检测蛋白质选豆浆、稀鸡蛋清。
提取:无水乙醇(溶解色素)+ SiO₂(研磨充分)+ CaCO₃(中和酸、防色素被破坏)。分离:纸层析法,溶解度大的随层析液扩散快、跑在上面。
⚠ 画滤液细线要细、直、齐,干后重复画1–2次;层析液不能没过滤液细线(否则色素溶入层析液,分不开)。
选一个检测对象,右边显示对应试剂、颜色现象与关键条件,并高亮易混点。
"为什么用这个材料"是高频问答。核心逻辑:目标结构明显、干扰少、易操作。
| 实验 | 选用材料 | 理由 |
|---|---|---|
| 观察有丝分裂 | 洋葱/蒜根尖分生区 | 分生区细胞分裂旺盛、排列紧密、易取易染 |
| 观察质壁分离 | 紫色洋葱鳞片叶外表皮 | 有紫色大液泡、颜色对比明显、是活的成熟细胞 |
| 观察 DNA/RNA 分布 | 人口腔上皮 / 洋葱表皮 | 细胞近无色、便于观察染色对比 |
| 观察线粒体 | 人口腔上皮细胞 | 取材易、活性好、近无色便于观健那绿显色 |
| 检测还原糖 | 苹果、梨、白萝卜汁 | 还原糖含量高且近无色,不掩盖砖红色 |
| 检测蛋白质 | 豆浆、稀蛋清 | 蛋白质含量高、颜色浅、便于观紫色 |
| 提取色素 | 新鲜深绿色叶片(菠菜) | 色素含量高、种类全,四条带清晰 |
| DNA 粗提取 | 鸡血(有核红细胞)/ 菜花 | 细胞核多、DNA 含量高(哺乳动物成熟红细胞无核,不选) |
给你一个"实验",从下面选出最合适的材料(点错会提示原因)。练"为什么用它"。
⚠ 盖玻片斜放缓下是为了避免产生气泡(气泡在视野里是黑边亮心的圆,别当成细胞)。观察人口腔上皮用生理盐水维持细胞形态。
用刀片把材料切成薄片(如叶横切、脂肪检测的花生子叶徒手切片),挑最薄的一片制片观察。太厚 → 光透不过 → 看不清。
🔔 触发:出现"放大倍数""换高倍""视野变暗/细胞变少""往哪移动装片""物镜镜头长短"。
🛠 动作:放大倍数=目镜×物镜;倍数↑→范围↓、数目↓、单个↑、变暗、距离近、物镜长。移动"偏哪移哪"。换镜:找到→移中央→转换器→细准焦。
⚠ 一行(线性):除以倍数比(4);铺满整个视野(面积):除以倍数比的平方(16)。看题目问"一行"还是"充满视野"!
🔔 触发:"检测某物质用什么试剂""出现什么颜色""为什么水浴加热"。
🛠 动作:套表:还原糖-斐林-砖红(水浴);脂肪-苏丹Ⅲ-橙黄;蛋白质-双缩脲-紫;淀粉-碘-蓝;DNA-二苯胺-蓝;CO₂-溴麝香草酚蓝(黄)/石灰水(浑浊);酒精-重铬酸钾-灰绿。
⚠ 斐林要"现配+水浴";双缩脲"先A后B少量、不加热"。两者试剂成分像(都含NaOH、CuSO₄)但用法/浓度/加热完全不同,必考区分。
🔔 触发:"最适合做该实验的材料是""为什么不用番茄/成熟红细胞"。
🛠 动作:看目标结构是否明显、有无颜色干扰、是否活/成熟。还原糖选近无色高糖(苹果梨白萝卜);质壁分离选紫洋葱表皮;有丝分裂选根尖分生区。
⚠ 哺乳动物成熟红细胞无细胞核,不能用于 DNA 粗提取/看有丝分裂;要用鸡血(有核红细胞)。
🔔 触发:给一段操作步骤,问"哪一步错了/应如何改"。
🛠 动作:盯高频错点:解离漂洗染色顺序、换镜先低倍找到、斐林现配水浴、双缩脲不加热、健那绿要活细胞、盖玻片斜放防气泡、层析液不没过细线。
⚠ 记死制片口诀"解漂染制";DNA/RNA观察要用8%盐酸;甲基绿吡罗红要现配。
① 污点三处排查:转目镜动→目镜;移装片动→装片;都不动→物镜。别用"转物镜"去判断(转物镜=换镜)。
② 先低倍找到再换高倍:直接上高倍找不到目标;换镜只调细准焦,别动粗准焦(压碎装片)。
③ 斐林试剂:现配现用 + 50–65℃水浴加热,才出砖红色;放久或不加热无现象。
④ 双缩脲不加热、先加A(NaOH)再加少量B(CuSO₄),测蛋白质紫色——别和斐林混。
⑤ 健那绿是活体染料,细胞必须活着才显蓝绿(观线粒体);而龙胆紫/醋酸洋红染的是解离后的死细胞染色体。
⑥ 材料选择理由:还原糖选近无色(苹果梨白萝卜)、质壁分离选紫洋葱表皮(有色大液泡、活细胞)、DNA粗提取不用无核的哺乳动物成熟红细胞。
⑦ 装片移动『偏哪移哪』:像是倒立的,物像偏左上就把装片往左上推。
⑧ 甲基绿—DNA—绿(核);吡罗红—RNA—红(质),现配现用、8%盐酸处理。
▸ "数目"两套算法别混:换镜后问"一行细胞数"按放大倍数之比算(400×/100×=4,除以4);问"充满视野的细胞总数"按比的平方算(除以16)。因为放大是线性的,面积按平方缩。审题抓"一行/一列"还是"整个视野"。
▸ 为什么解离后看不到连续分裂:解离(盐酸+酒精)已把细胞杀死并固定,同一细胞不再变化;你看到的各时期是群体中不同细胞的定格。要"活体动态"得用无解离的活材料+显微延时,超出中学装片能力。
▸ 颜色反应本质:斐林/双缩脲都是Cu²⁺参与——还原糖把 Cu²⁺还原为 Cu₂O(砖红,需加热);双缩脲是蛋白质肽键与 Cu²⁺在碱性下形成紫色络合物(不需还原、不加热)。理解了就不会背反。
▸ 健那绿显色原理:线粒体内进行有氧呼吸使染料保持氧化态(蓝绿色);细胞质基质中染料被还原为无色。所以只有活性线粒体处呈蓝绿——细胞死了、呼吸停了就不显色。
▸ 染色剂"碱性/酸性"辨析:龙胆紫、醋酸洋红、改良苯酚品红都是碱性染料,专染带负电的染色体(DNA);甲基绿(染DNA)/吡罗红(染RNA)是利用二者对DNA/RNA亲和力差异,不是酸碱之分。
thebest2dan · 生物攻坚包 · 配套:实验探究(实验设计方法论)、光合作用/呼吸作用